Preparación de muestras

Normalmente, las muestras que se preparan para las autorradiografías deben estar completamente secas para reducir al mínimo la atenuación de la emisión beta. Si se coloca una muestra o una membrana húmeda en un envoltorio de plástico, la sensibilidad y la resolución se verán gravemente perjudicadas, sobre todo cuando se utilizan isótopos de baja energía (p. ej., 35S), y no se podrá detectar de manera eficaz el 3H. Además, es importante que el material de la membrana utilizado en un estudio sea el que tenga la máxima afinidad con la biomolécula de la transferencia, por ejemplo, nailon cargado positivamente para ácidos nucleicos. La elección adecuada de la membrana garantiza que la radioactividad se acerque más a la superficie (lado activo de la membrana), lo cual hace que pueda estar más cerca de la película y de la capa de fósforo para aumentar al máximo la sensibilidad y la resolución espacial.

Suscita cierta preocupación el hecho de garantizar que una membrana se pueda rehibridar tras su secado para la autorradiografía. Por lo general, si las moléculas de la membrana se han fijado bien y la membrana se ha bloqueado e hibridado de forma correcta, la deshibridación y la rehibridación posterior al secado no se ven afectadas negativamente.

La definición operativa de secado al aire es suficiente para utilizarla con BioMax TranScreen, ya que, si hay algo de humedad, se pueden producir adherencias importantes o problemas de electricidad estática si se expone una membrana a la superficie de una película. La superficie de BioMax TranScreen soporta de forma eficaz los efectos adversos que el agua o el hielo ocasionarían normalmente en el fósforo.

Cuarto oscuro y luces rojas de seguridad

IMPORTANTE: La película BioMax MS es extremadamente sensible a la luz verde, amarilla y azul, y solo debe exponerse a la luz roja de seguridad con filtro GBX-2 (exclusivamente con bombilla de 7,5 o 15 vatios). El uso de otros filtros de luz roja de seguridad o de bombillas de mayor potencia aumentará de manera considerable el velo de fondo de la película expuesta. Consulte las instrucciones y precauciones que se proporcionan con la película. BioMax TranScreen es resistente a la exposición a la luz durante periodos indefinidos de tiempo. Además, el tiempo de emisión de luz que transcurre después de la exposición del fósforo es suficientemente corto (segundos) como para que no se tengan que tomar precauciones especiales relacionadas con la adaptación de la pantalla a la oscuridad.

Instrucciones acerca del uso del sistema BioMax TranScreen

PASO 1. Si se dan las condiciones adecuadas en el cuarto oscuro, saque la película de la caja e introdúzcala en la pantalla de refuerzo BioMax TranScreen. La pantalla de refuerzo BioMax TranScreen está diseñada para ayudarle a reducir al mínimo la generación de velo en la película cuando las condiciones en el cuarto oscuro no son las adecuadas. Consulte el apartado en el que se habla del cuarto oscuro y de las luces rojas de seguridad para obtener información acerca de las condiciones adecuadas que se deben dar en el cuarto oscuro.

PASO 2. Coloque el lado activo de la muestra en la capa de fósforo de la pantalla de refuerzo, tal y como se muestra en el diagrama.

PASO 3. Coloque la combinación película-pantalla en un cassette y ciérrelo.

PASO 4. A continuación, coloque el cassette en un congelador (de −60 a −80 °C). Es importante utilizar el congelador para aumentar al máximo la sensibilidad del sistema.

PASO 5. Después de la exposición, deje que se caliente el cassette a temperatura ambiente durante al menos 15 minutos antes de abrirlo. De este modo, evitará que se dañe la bisagra del cassette y se reducirá al mínimo la condensación de agua que se forma en la película expuesta, en la muestra y en la pantalla BioMax TranScreen.

PASO 6. Si se dan las condiciones adecuadas en el cuarto oscuro, abra el cassette y desmonte la estructura tipo sándwich. La pantalla de refuerzo BioMax TranScreen tiene una muesca en una esquina para facilitar el acceso a la película.