Algunos de los desafíos a los que se enfrenta un microscopista de electrones son la preparación de muestras, la evaluación microscópica y la técnica fotográfica. Sin embargo, es la imagen fotográfica final de la muestra la que le permite evaluar y comunicar los resultados. Si sigue las recomendaciones básicas de almacenamiento, manipulación y procesamiento de productos para micrografías electrónicas, podrá conseguir la calidad, la uniformidad y la repetibilidad que precisa en este tipo de micrografías.

Almacenamiento de películas para micrografías electrónicas

Las películas para micrografías electrónicas (EM) son productos fotográficos y, a causa de sus propiedades especiales, pueden cambiar con el tiempo. Estos cambios podrían acelerarse con las altas temperaturas, la humedad relativa alta y las interacciones químicas con materiales que no son inertes fotográficamente hablando (como, por ejemplo, determinados plásticos, disolventes, lacas, pinturas y gases). Si se almacenan películas durante demasiado tiempo o en condiciones desfavorables, se podría perder la velocidad, podría aumentar el velo, cambiar el contraste o se podría producir una combinación de todos estos efectos. Podrá prolongar la vida de sus películas EM si sigue las sencillas reglas que se indican a continuación.

Películas no expuestas

Por regla general, evite las altas temperaturas y los niveles altos de humedad. Las películas para micrografías electrónicas se pueden almacenar en su caja original resistente a la humedad a temperatura ambiente si no se superan los 21 °C (70 °F) y con una humedad relativa del 50 %.

Periodo de calentamiento después de sacarlas del almacenamiento en frío

Para evitar la condensación de humedad en las superficies frías de las películas, deje que se calienten hasta alcanzar aproximadamente la temperatura ambiente antes de abrir la caja hermética en uso. Durante el calentamiento, separe las cajas unas de otras después de sacarlas del almacenamiento en frío para que circule mejor el aire. El periodo de calentamiento es de 2 horas (si se sacan del frigorífico) o 3 horas (si se sacan del congelador).

Películas expuestas

Procese las películas lo antes posible después de la exposición para evitar que la imagen latente se estropee. Puede almacenar a temperatura ambiente las películas EM expuestas durante unas 72 horas si la temperatura es inferior a 24 °C (75 °F) y la humedad relativa es del 50 % o más baja. Si va a almacenar las películas durante un largo periodo, protéjalas de la humedad; para ello, métalas en un recipiente estanco e introdúzcalas en el frigorífico. No deje las películas expuestas en las platinas más tiempo del necesario.

Películas procesadas

Para guardar las películas EM durante largos periodos de tiempo, debe prestar especial atención a los métodos de procesamiento. Consulte el apartado “Procesamiento para conseguir la estabilidad de la imagen” de esta publicación y siga paso a paso las instrucciones de procesamiento. Los negativos y las impresiones EM se pueden almacenar a temperaturas normales de unos 21 °C (70 °F) o inferiores. Se deben almacenar en un lugar seco donde la humedad relativa esté entre el 30 y el 50 %; una humedad relativa por debajo del 30 % provoca una fragilidad excesiva, mientras que la humedad por encima del 60 % favorece el crecimiento de moho y hongos. Lo más conveniente es mantener una temperatura y humedad constantes, aunque si la temperatura es algo superior de forma temporal, no se debería producir ningún daño si la humedad relativa es inferior al 40 %. En cambio, una temperatura superior a los 24 °C (75 °F), junto con una humedad relativa por encima del 60 %, provoca el crecimiento acelerado de moho u hongos, el deterioro de la imagen y hace que las superficies del negativo se peguen o adquieran un aspecto vidrioso.

Proteja sus negativos e impresiones de los gases de determinados compuestos de azufre (como el sulfuro de hidrógeno y el gas de carbón) y de gases de óxidos de nitrógeno, peróxidos, formaldehído, ozono y otros gases oxidantes perjudiciales. Mientras que las pinturas de látex no suponen ningún problema, las emanaciones de las pinturas con derivados del petróleo pueden provocar un cambio de color importante; no coloque los negativos en una zona recién pintada con pinturas con derivados del petróleo durante al menos 4 semanas.

Manipulación en cuartos oscuros y uso de luces rojas de seguridad

Dado que la emulsión y la base de los laterales de las películas se pueden rayar si se manipulan con poco cuidado, y puesto que las superficies también pueden quedar marcadas al entrar en contacto con dedos húmedos, se deben tomar varias precauciones a la hora de manipular los productos fotográficos EM en el cuarto oscuro. Las siguientes recomendaciones sobre la manipulación en cuartos oscuros le ayudarán a evitar la mayoría de los problemas más comunes.

1. Compruebe que no se filtre nada de luz en la parte de carga de películas ni en la sala de procesamiento. Para ello, apague todas las luces y quédese en el cuarto oscuro durante unos 10 minutos. Durante este tiempo, los ojos se acostumbrarán a la oscuridad y podrá ver, por tanto, si entra algo de luz a la sala por las rendijas de la puerta, por los conductos de ventilación o calefacción o por otras zonas.
2. Antes de apagar las luces para cargar o procesar películas, asegúrese de tener todo lo que necesite. Si guarda películas expuestas en sus cajas originales, márquelas de forma clara. Separe las cajas de los negativos expuestos de las cajas de películas sin exponer para no exponer el mismo material dos veces.
3. Siga las recomendaciones sobre la iluminación segura en los cuartos oscuros únicamente de la manera que se indica en la hoja de instrucciones que se incluye con las películas. Para obtener más información, consulte el apartado sobre luces rojas de seguridad que aparece a continuación.
4. Manipule las películas por los bordes para evitar que se rayen o se rocen.
5. Asegúrese de tener las manos limpias y completamente secas cuando vaya a manipular películas.
6. Retire cualquier partícula de polvo, fibra de papel o plástico que se pueda haber depositado en la película durante el envío. Si estas partículas no se quitan antes de la exposición, podrían aparecer manchas de polvo no deseadas (puntos muy pequeños) en el negativo y contaminar así la columna del microscopio. Para retirar estas partículas, limpie la superficie de la emulsión con un pincel de pelo de camello limpio y seco. También se puede inyectar aire, nitrógeno o gas a presión para retirar las partículas de la superficie. Si utiliza gas a presión, asegúrese de que esté limpio, seco y sin aceite, y que la presión del aire no supere los 1,4 kg/cm2 (20 psi), ya que una presión excesiva puede dañar la superficie de la emulsión.
7. Saque las películas de la caja y cárguelas en un soporte adecuado antes de realizar el bombeo de vacío previo. No haga el bombeo de vacío previo en la película con la caja abierta que contiene el cartón protector, ya que el tiempo de bombeo de vacío se extenderá demasiado y la humedad de las láminas de cartón contaminará rápidamente el aceite de la bomba mecánica.
8. Evite la exposición de aspectos clave en los bordes de la película. Los bordes exteriores de 6,3 mm (1/4 pulgadas) pueden verse afectados por la manipulación o el procesamiento.

Uso de luces rojas de seguridad

Las películas para micrografías electrónicas deben manipularse y procesarse cumpliendo las condiciones de iluminación de seguridad adecuadas. Carestream Molecular Imaging recomienda el uso de un foco de luz roja de seguridad equipada con un filtro GBX-2 y una bombilla esmerilada de 15 W para obtener la máxima protección y la mejor visibilidad en el cuarto oscuro. La luz roja de seguridad debe colocarse de tal modo que siempre esté a una distancia mínima de 1,2 metros (4 pies) con respecto a la película.

Cómo evitar las marcas estáticas

Si las películas están sometidas a fricción, es posible que se carguen positiva o negativamente con electricidad estática, sobre todo cuando la humedad relativa es baja. La película trata de volver a su estado neutro mediante la transferencia de electrones hacia o desde otros objetos. A veces esta transferencia se produce lentamente sin que haya ningún efecto desfavorable; sin embargo, otras veces la carga se acumula muy rápido y no puede disiparse bien. En estas ocasiones, la descarga repentina produce calor, luz y radiación ultravioleta. La radiación ultravioleta forma una imagen latente en la película con la forma de una descarga estática, lo que genera imágenes no deseadas en los negativos procesados. Las marcas parecidas a las ramas de los árboles que ve en ocasiones en los negativos son provocadas por la descarga estática. Son propios de la carga negativa que se descarga en un pequeño punto u objeto. No obstante, las marcas estáticas pueden adoptar otras formas que no se reconocen con tanta facilidad. Por ejemplo, las manchas difusas con centros oscuros se producen cuando una carga se acumula en la platina de la película y, a continuación, se descarga en la película. Durante la fabricación y el embalaje, Carestream toma todas las precauciones posibles para evitar la acumulación de cargas estáticas en los productos sensibilizados. Las siguientes precauciones le ayudarán a evitar los problemas provocados por la electricidad estática:

• Evite manipular las películas con movimientos bruscos que puedan provocar fricción.
• Si es posible, mantenga la humedad relativa entre el 40 y el 60 % en las zonas donde cargue y descargue películas.
• Mueva lentamente las piezas de la platina y retire los componentes de igual modo a la hora de cargar o descargar películas.

	Manchas circulares con centros oscuros provocadas por una descarga de un objeto cercano a una película con carga positiva.
	Marcas estáticas similares a las ramas de los árboles provocadas por una descarga de un punto u objeto pequeño con carga negativa.